Artesis Hogeschool Antwerpen - Industriële Wetenschappen - Toegepaste proteomics op industriële en potentieel industriële fermentaties

Abstract: In dit project zal onderzoek verricht worden op de productie van sophorolipiden door de gist Candida bombicola ATCC 22214 met gebruik van diverse koolstofbronnen. Groei en sophorolipidepro-ductie zijn bij deze gist grotendeels ontkoppeld. In de N-limiterende omstandigheden van de stationaire fase zal C. bombicola in bepaalde omstandigheden grote hoeveelheden van deze sophorolipiden secreteren. Onderzoek naar de ideale fermentatie-omstandigheden (variatie van koolstofbron en moment van toevoegen, stikstoftoevoer en aëratie) voor de industriële productie gebeurt aan het labo Biotechnologie van de Hogeschool Antwerpen, departement IWT, campus Paardenmarkt. Afhankelijk van de geproduceerde biomassa en de opbrengst aan sophorolipiden zullen de optimale omstandigheden bepaald worden. Microbiële cellen worden afgezonderd in neutrale omstandigheden en in omstandigheden van inductie. De biomassaproductie, het substraatverbruik, de stikstofconcentratie en de sophorolipideproductie zullen gevolgd worden. De opbrengst en samenstelling aan sophorolipiden zal bepaald worden door middel van hogedruk vloeistofchromatografie op een ‘reversed phase’ C18 kolom ge-combineerd met een ‘evaporative light-scattering’ detector. De analyse van de overeenkomstige eiwitfracties gebeurt dan in het laboratorium voor plantenbiochemie en -fysiologie aan de UA. In een eerste stap wordt het proteoom gescheiden met behulp van 2-dimensionele gelelektroforese. Via differentiële beeldanalyse zal elk proteoom representatief voor de verschillende omstandigheden met elkaar vergeleken worden. De proteïnen die een differentiële en gecorreleerde regulatie hebben ondergaan, worden geselecteerd voor verdere identificatie. Deze identificatie gebeurt door middel van tandem massaspectrometrische sequentieanalyse gecombineerd met databank score algoritmes.